利用斑马鱼评价化妆品的抗皱功效
2022-05-15 / 李宁编辑
评价原理
皮肤中胶原蛋白、弹性蛋白、β-半乳糖苷酶活性及活性氧的含量等是决定皮肤弹性高低的关键。当机体中胶原蛋白与弹性蛋白不足、β-半乳糖苷酶活性升高或活性氧代谢失衡时，皮肤弹性将下降，皱纹也随之产生。因此，通过检测斑马鱼体内胶原蛋白、弹性蛋白、β-半乳糖苷酶活性及活性氧的含量即可完成对化妆品抗皱功效的评价。X-Gal是β-半乳糖苷酶的显色底物，β-半乳糖苷酶可将其切割，生成不溶的蓝色化合物，该蓝色化合物的含量即可表征β-半乳糖苷酶的活性。荧光探针DCFH-DA本身没有荧光，可自由穿过细胞膜，其进入胞体后可被细胞内的酯酶水解生成DCFH，而DCFH不能通过细胞膜，将被留在胞体内。当胞体内活性氧过量积聚时，DCFH将被氧化生成荧光物质DCF，因此DCF的荧光强度即表征了细胞内活性氧的含量。
皮肤中胶原蛋白、弹性蛋白、β-半乳糖苷酶活性及活性氧的含量等是决定皮肤弹性高低的关键。当机体中胶原蛋白与弹性蛋白不足、β-半乳糖苷酶活性升高或活性氧代谢失衡时，皮肤弹性将下降，皱纹也随之产生。因此，通过检测斑马鱼体内胶原蛋白、弹性蛋白、β-半乳糖苷酶活性及活性氧的含量即可完成对化妆品抗皱功效的评价。X-Gal是β-半乳糖苷酶的显色底物，β-半乳糖苷酶可将其切割，生成不溶的蓝色化合物，该蓝色化合物的含量即可表征β-半乳糖苷酶的活性。荧光探针DCFH-DA本身没有荧光，可自由穿过细胞膜，其进入胞体后可被细胞内的酯酶水解生成DCFH，而DCFH不能通过细胞膜，将被留在胞体内。当胞体内活性氧过量积聚时，DCFH将被氧化生成荧光物质DCF，因此DCF的荧光强度即表征了细胞内活性氧的含量。
评价方案
（1）基因检测：
将斑马鱼随机分成空白对照、阳性对照与供试物组，各组经处理后应用RT-qPCR技术对鱼体内胶原蛋白基因（coI1a1a、col1a1b、col1a2）和弹性蛋白基因（eln1、eln2）的相对表达量进行检测。
（2）β-半乳糖苷酶活性检测：
将斑马鱼随机分成空白对照、阳性对照与供试物组，各组经处理后进行X-Gal染色。
（3）活性氧检测：
将斑马鱼随机分成空白对照、模型、阳性对照与供试物组，各组经处理后通过荧光标记法定量检测鱼体中的活性氧含量。
（1）基因检测：
将斑马鱼随机分成空白对照、阳性对照与供试物组，各组经处理后应用RT-qPCR技术对鱼体内胶原蛋白基因（coI1a1a、col1a1b、col1a2）和弹性蛋白基因（eln1、eln2）的相对表达量进行检测。
（2）β-半乳糖苷酶活性检测：
将斑马鱼随机分成空白对照、阳性对照与供试物组，各组经处理后进行X-Gal染色。
（3）活性氧检测：
将斑马鱼随机分成空白对照、模型、阳性对照与供试物组，各组经处理后通过荧光标记法定量检测鱼体中的活性氧含量。
评价指标
coI1a1a、col1a1b、col1a2、eln1和eln2基因的表达量；
β-半乳糖苷酶活性抑制率；
氧化损伤抑制率
coI1a1a、col1a1b、col1a2、eln1和eln2基因的表达量；
β-半乳糖苷酶活性抑制率；
氧化损伤抑制率
结果展示
